ELISA測定一般遵循以下步驟:固相包被→加樣品→溫育→洗滌→加酶結(jié)合物→溫育→洗滌→加底物→溫育→顯色→終止顯色→比色

　　目前各種形式的ELISA自動(dòng)分析儀已經(jīng)進(jìn)入市場,如廣泛應(yīng)用于血站系統(tǒng)的微板式全自動(dòng)酶免分析儀,其試劑為開放式的,而對于其它類型的,則試劑和儀器往往是配套的。但當(dāng)前大部分醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室均采用手工操作加儀器測定的方式。ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。加樣器是一種比較精密的工具,其在長時(shí)間使用時(shí)會因機(jī)械磨損或者推動(dòng)桿內(nèi)附著血痂等原因造成加樣不準(zhǔn),尤其是對于樣本量較大的臨床實(shí)驗(yàn)室,因此必須定期對加液器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。每次加不同的標(biāo)本時(shí)均需更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染。加樣時(shí)速度不可太快,避免將標(biāo)本加在孔壁上部,并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)還應(yīng)當(dāng)注意操作時(shí)差對結(jié)果的影響,操作時(shí)差是指加入標(biāo)本、試劑及混勻時(shí)間的差異。操作時(shí)差在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中都存在,尤其是手工操作,日常檢測標(biāo)本多達(dá)幾百個(gè),從加入個(gè)標(biāo)本到后一個(gè)標(biāo)本,需幾十分鐘,加入試劑及混勻等均存在著前后時(shí)間差異,使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)間不一致,操作時(shí)差對競爭法檢測的結(jié)果影響更大,在加酶結(jié)合物和底物時(shí)可用定量多道。